肉的宰后嫩化基本归因于肌原黏胶玻璃植物纤维组成的危害，肌原黏胶玻璃植物纤维组成是由内源性球蛋清酶酶质水解反應反應酶生物吸附肌原黏胶玻璃植物纤维和内部系骨架球蛋清酶酶质导致的。与数十多年来向来是喜爱主焦点的钙球蛋清酶酶质酶有所不同，胱天球蛋清酶酶质酶（caspases）近期成了感好奇心语录题。胱天球蛋清酶酶质酶在内部系凋亡的制定过程起着至关注重的角色，进来caspase-3在去世球蛋清酶酶质水解反應反應中的角色是各种面和较为复杂的，故此引起进一个步骤科学探索。S-亚硝基化实现调整钙挥发释放、能量消耗分解代谢、球蛋清酶酶质质生物吸附和内部系凋亡来调整肉嫩，包扩嫩度和持水功能。前中期科学探索会发现S-亚硝基化行下降依赖症线粒体的caspase-3级联反應，这或者是肌内部系凋亡和牛肉片品質转变 的原因分析。caspase-3的科学探索要点是其与内部系凋亡的内在联系，只不过，通常很少有科学探索浅论S-亚硝基化调整caspase-3的制度化。

2024年9月由武汉农林牧大学考研张万刚专家组织在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生物制品为该研究提供了亚硝基化突显组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

中文版版头：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

学术期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2021年影晌要素：5.7

发表文章时间间隔：2024年9月

顾客院校：南京农业大学

实验装修材料：蛋白

拜谱给出工艺：亚硝基化修饰组学

枝术交通路线：

一、研究方案最后

01.Caspase-3活性氧

日前尚不很清楚NO对caspase-3的抑做成用用是否有归因于NO介导的S-亚硝基化，不同于含量梯度方向的GSNO看做外源性NO销售，以诱惑caspase-3的离体S-亚硝基化。导致发现，与不会GSNO的组比起来，100、200和400μM GSNO组的caspase-3催化特异性明显减低（图1），与已经新闻稿件统一。GSNO整理减低caspase-3催化特异性的风险缘故仍仍待阐发。

图1 各不相同浓硫酸浓度的GSNO处理对caspase-3渗透性的印象

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化地步

设计探讨Caspase-3的亚硝基化系数，以相不对GSNO对Caspase-3的的反应性。经GSNO操作后，探测到caspase-3蛋清S-亚硝基化比强度增添（图2）。这个結果取决于，外源性GSNO养成可成就分析caspase-3的身体外S-亚硝基化。令人感动惊愕的是，在不能GSNO存在着的比对组中探测到个绚烂的S-亚硝基化带，这取决于caspase-3可能发现内源性的S-亚硝基化。最后，本设计探讨中caspase-3的S-亚硝基化系数较高，而caspase-3的炎症因子聊天降底，这与以往的设计探讨不对。只不过，caspase-3的炎症因子聊天S-亚硝基化装饰位点尚不很清楚，还必须进步的探寻。

图2 GSNO外理对caspase-3S-亚硝基化总体水平的影向

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化遮盖组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的编码编码序列。紫色标签的编码编码序列认为S-亚硝基化肽，红色的标签的C认为S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱分析

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3降解塑料结血清

结血清作为一个本身根本的组织神经元骨架血清，在能维持肌组织神经元形式的形式完好性和缩紧性几个方面起着根本角色，调查S-亚硝基化caspase-3对结血清化学化学降解的特别敏理性有着根本目的。与Std（未用胱天血清酶-3和GSNO孵育的默认肌玻璃玻纤血清）组相对比，0 μM GSNO组（肌原玻璃玻纤和caspase-3的孵育，无GSNO）的完好结血清横向为显著下降，显示信息caspase-3对结血清有着不确定性的血清淀粉水解意识。在GSNO孵育后，完好结血清的横向清晰不断增加（P < 0.05）。除此以外，当GSNO氧浓度上升时，完好结血清的横向不断上浮（P < 0.05）（图5）。这样遇到体现了，SNO装饰的caspase-3以横向依靠的方式抑止结血清的化学化学降解。

图5.S-亚硝基化caspase-3挥发结蛋清

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3可降解肌钙血清-T

肌钙蛋清-T (TnT)是原肌球蛋清控制担负肌回缩的细条的须要肌原棉氯纶蛋清。TnT的可挥发本质特征是检查测量到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化前提条件下，caspase-3对TnT的可挥发具体情况如下图右图6右图，与Std组（包含caspase-3和GSNO的肌原棉氯纶）不同于，caspase-3组中30 kDa TnT细节描写为相关性延长，阐明caspase-3进行了TnT的可挥发，另外，caspase-3与GSNO的孵育以至于30 kDa TnT的大幅度拉低。在100和200 μM GSNO组相互也没有检查测量到很深的的差异(P > 0.05)，而当GSNO的浓度值高达400 μM 时，该细节描写为相关性才能减少(P < 0.05)。这么多看到阐明了SNO绘制的caspase-3对TnT可挥发的控打造用。结蛋清和TnT是caspase-3的强烈底物，而GSNO净化处理大幅度拉低caspase-3的活力机会以至于肌原棉氯纶蛋清可挥发程度上大幅度拉低。结合以上所论，NO帮助的S-亚硝基化能够按照绘制半胱氨酸残基来控制caspase-3的活力，借以进几步印象其对结蛋清和TnT的蛋清油脂水解作用，关键在于印象牛羊肉品控。

图6. S-亚硝基化caspase- 3分解肌钙淀粉酶-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人心得体会

本科学研究指在研究综述S-亚硝基化对caspase-3掩盖的的影晌下列关于接下来对牛羊肉片肌原黏胶弹性纤维身体之外分解的的影晌。蛋清S-亚硝基化会掩盖caspase-3的半胱氨酸残基，若想产生caspase-3可溶性大大减少，进一个步骤能够抑制了其对牛羊肉片肌原黏胶弹性纤维蛋清的蛋清溶解本事。

三、拜谱个人总结

理论探讨用了酶活测得，亚硝基化掩盖组学进行分析，WB等判断技术手段，发展血清S-亚硝基化可掩盖caspase-3的半胱氨酸残基，这引致了caspase-3特异性的减小，并举两步控制了其对牛肉片肌原弹性纤维血清的血清油脂水解业务能力。本理论探讨为定义血清质亚硝基化对色泽的调节作用制度能提供没事个新的上帝视角。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的核营养素组学、表达核营养素组学、代谢率组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸系列的车辆，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺酸性反应、total腐蚀恢复原、解离巯基，欢迎大家咨询！

考生文献综述：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663